顶空气相色谱法测定阿苯达唑苯残留

厉小雯，应一锋，楼赛丽

（浙江普洛康裕制药有限公司，浙江东阳 322118）

阿苯达唑（又名丙硫达唑）是一种高效、低毒的广谱驱虫药，作为苯并咪唑类药物中杀虫作用最强的一种，适用于驱除蛔虫、蛲虫、钩虫、鞭虫、钩虫、粪圆线虫等寄生虫[1]。阿苯达唑在体内代谢为亚砜类或砜类后，可以抑制寄生虫对葡萄糖和其他多种营养的吸收，导致虫体糖原耗竭，并阻碍延胡索酸还原酶系统，从而影响三磷酸腺苷（ATP）的产生，使寄生虫无法存活和繁殖[2]。

在药物的生产过程中，苯残留可能来源于溶剂残留、生产工艺及设备、原辅料降解、包装材料及环境等因素[3]。根据2020 版《中国药典》四部通则中的残留溶剂测定法第二法（毛细管柱顶空进样程序升温法）[4]和《杂质：残留溶剂的指导原则》（ICH Q3C）[5]，苯属于Ⅰ类溶剂，其在原料药中的限度标准≤2 mg/kg。苯被列为第一类致癌物，具有较大的神经毒性与致癌性，对体内诸多器官有严重危害性，因此必须严格控制药物中的苯残留。本文采用顶空气相色谱法（HS-GC）对阿苯达唑中苯残留进行检测和控制，确保药品的使用安全。

1.1 材料与仪器

阿苯达唑原料药，市售；
苯，分析纯，上海展云化工有限公司；
甲醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；
二甲基亚砜（DMSO），HPLC 级，菲立试剂（香港）有限公司。

8890 气相色谱仪（FID 检测器，7697A 顶空进样器），美国Agilent 公司；
XS205DU 分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 试验方法

1.2.1 溶液的制备

空白溶液（稀释剂）：二甲基亚砜。

供试品溶液：精密称取原料药约0.5 g，置20 mL顶空瓶中，加入DMSO 5 mL，加盖密封。

对照品溶液：精密称取苯约100 mg（约110 μL），置100 mL 容量瓶中，加DMSO 溶解定容至刻度，得原液；
精密量取1 mL 原液置100 mL 容量瓶中，加DMSO 稀释定容至刻度，即得对照品贮备液；
精密量取2 mL 对照品贮备液，置100 mL 量瓶中，加DMSO稀释定容至刻度，即得测试液。

1.2.2 色谱条件

采用DB-624毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）；
柱温采用程序升温，起始温度40 ℃维持5 min，再以10 ℃/min 升温至200 ℃，维持5 min；
载气：N2；
分流比：2 ∶1；
进样口温度：200 ℃；
检测器温度：240 ℃；
流速：1.5 mL/min；
顶空进样，100 ℃维持30 min。

1.2.3 专属性

称取苯101.68 mg、甲醇102.17 mg，置同一20 mL容量瓶中，加DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀得溶液1；
量取1 mL 溶液1 置50 mL 容量瓶中，加DMSO 稀释定容至刻度，得溶液2；
量取1 mL 溶液2 置50 mL 容量瓶中，加DMSO 稀释定容至刻度，作为专属性样品溶液。

1.2.4 线性及范围

取1.2.1项下对照品贮备液，分别精密量取适量，制备成0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.40 μg/mL、1.01 μg/mL、1.21 μg/mL、2.02 μg/mL 的系列标准溶液。照1.2.2 项下条件进行测定，在相对限度浓度50%、100%、200%、500%、600%、1 000%的范围内，以苯的浓度和峰面积分别作为横坐标、纵坐标来进行线性回归分析。

1.2.5 定量限及检测限

取1.2.1 项下对照品贮备液，分别精密量取适量，制备成定量限溶液和检测限溶液，照1.2.2 项下条件进行测定，以信噪比分别约20 和10 为标准。

1.2.6 精密度

按1.2.1 项制备供试品溶液，共6 份，分别由2 名工作人员照1.2.2 项下条件分别进行测定，计算精密度和中间精密度。

1.2.7 准确度

精密称取原料药0.5 g，置20 mL顶空瓶中，共9份。分别加入相对限度浓度50%、100%、1 000%三个水平的对照品溶液（每个溶液3 份），照1.2.2 项下条件进行测定，计算回收率。

1.2.8 耐用性

取1.2.1 项下对照品溶液，分别改变流速（1.3 mL/min、1.7 mL/min）和柱温起始温度（38 ℃、42 ℃），考察各变化条件下苯的拖尾因子和理论板数。

2.1 系统适应性

取对照品溶液在1.2.2 项下条件下重复进样6 次，峰面积的RSD为2.0%，小于15%，说明系统适用性良好。

2.2 专属性

空白溶液对苯（保留时间9.5 min）的检测无干扰；
混合溶液图谱中苯与甲醇的分离度为38.1，与其他未知杂质也能实现良好分离，相互之间不存在干扰（见图1）。

图1 混合溶液图谱

2.3 线性及范围

苯的线性方程为y=25.459x-0.315 2，线性相关系数r=0.999 9，线性范围为0.10～2.02 μg/mL。在该范围内，苯的浓度与峰面积之间存在良好的线性关系（见图2）。

图2 标准曲线图

2.4 定量限及检测限

经计算，定量限为0.10 μg/mL，信噪比21.8；
检测限为0.05 μg/mL，信噪比11.4。在定量限浓度下，重复进样6 次，苯峰面积的RSD 为3.1%，符合测定要求。

2.5 精密度

同一工作人员苯峰面积的RSD分别为1.2%和1.1%（n=6），所有样品苯峰面积的RSD为2.3%（n=12），说明方法精密度良好。

2.6 准确度

如表1 所示，苯的回收率在102.5%～110.2%，RSD小于10%。说明该方法适用于苯残留的检测，结果准确。

表1 回收率结果

2.7 耐用性

如表2 所示，每个变化条件下对照品溶液中苯的拖尾因子均在0.8～1.2，说明色谱条件的微小变化不影响苯的峰形；
与标准条件相比，苯的拖尾因子和理论板数没有显著变化，说明该方法的耐用性良好。

表2 耐用性结果

采用HS-GC 法测定苯残留时，要先考虑样品的溶解性，并确定合适的溶剂。阿苯达唑不溶于水、乙醇，微溶于丙酮、氯仿[1]。二甲基亚砜沸点较高（189℃），溶剂出峰时间较晚，不会干扰苯的测定；
且二甲基亚砜作为极性很高的“万能溶剂”[6]，能与大多数有机溶剂互溶，能很好地溶解苯。因此二甲基亚砜作为首选溶剂。保留时间5.3 min 的峰为二甲硫醚，是溶剂二甲基亚砜受热分解产物[7]，对苯残留的检测没有干扰。

顶空进样适合检测低挥发性（沸点不高于100 ℃）的物质[8]，苯的沸点为80.1 ℃，因此顶空进样作为首选进样方式。将顶空平衡时间由20 min 增加至30 min，平衡温度由80 ℃提高至100 ℃，能保证有更多的苯逸出，从而增加苯的响应，使得灵敏度能够满足要求。

本文建立了阿苯达唑中苯残留的顶空气相色谱法（HS-GC）测定方法。结果显示，苯与阿苯达唑生产过程中引入的其他杂质能够有效分离，专属性良好；
该方法操作简便，灵敏度、精密度、准确度均能满足残留分析的要求，方法耐用性、线性及范围良好，可对阿苯达唑原料药中苯残留量进行定量控制。

猜你喜欢 阿苯达唑二甲基亚砜耐用性 液质联用法测定牛乳中阿苯达唑残留标志物残留量食品工业(2022年9期)2022-10-21考虑EPR规制和“以旧换新”模式的耐用品生产与回收策略上海管理科学(2021年5期)2021-12-09阿苯达唑混悬剂的质量评价及其含量检测方法的建立现代畜牧科技(2021年2期)2021-03-19减压精馏法精制二甲基亚砜化学与生物工程(2021年2期)2021-02-25聚丙烯腈生产中溶剂二甲基亚砜回收*化工科技(2020年1期)2020-03-16以二甲基亚砜为溶剂分离多种共沸物系的研究安徽化工(2018年6期)2019-01-11阿苯达唑及其亚砜在鲫鱼体内的药动学及残留消除江苏农业科学(2017年24期)2018-01-12建立柴连口服液中柴胡鉴别的薄层色谱法科学与财富(2017年32期)2017-12-20高效液相色谱法定性鉴别人参口服液中人参皂苷Rg1、Re的方法研究科学与财富(2017年29期)2017-12-20石化行业电气系统防腐技术研究科学与财富(2017年33期)2017-12-19