HPV,E6/E7、宫颈液基细胞学、阴道镜联合检查在宫颈癌筛查中的价值分析

鲍双双 朱献斐 唐咏梅

[摘要] 目的 探究高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）E6/E7、宫颈液基细胞学（thinprep cytologic test，TCT）、阴道镜检查对宫颈癌及癌前病变筛查价值的差异。方法 选取2020年7月至2021年7月义乌市中心医院收治的均进行过HPV E6/E7 mRNA、TCT及阴道镜检查的宫颈异常患者753例，以活检组织病理结果为金标准，分析不同检查方法对宫颈癌及癌前病变的筛查价值。结果 活检组织病理学检测结果显示，753例病例中有低级别鳞状上皮内病变 （low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）532例，高级别鳞状上皮内病变（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）203例，鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）18例；
HPV E6/E7检出阳性407例，TCT检出阳性288例，阴道镜检查阳性206例；
HPV E6/E7、TCT檢查的诊断一致性为62.42%；
与联合检测比较，HPV E6/E7、TCT及阴道镜检测HSIL+SCC的敏感度、特异性、准确性均较低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 HPV E6/E7、TCT、阴道镜三者联合检测可提高对宫颈癌的筛查价值，可帮助临床更好地进行诊断与治疗。

[关键词] 高危型人乳头瘤病毒；
宫颈液基细胞学；
阴道镜检查；
宫颈癌

[中图分类号] R361+.3      [文献标识码] A      [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.20.004

Value of combined HPV E6/E7， cervical liquid-based cytology and colposcopy in the screening of cervical cancer

BAO Shuangshuang， ZHU Xianfei， TANG Yongmei

Department of Pathology， Yiwu Central Hospital， Yiwu 322000， Zhejiang， China

[Abstract] Objective To investigate the difference of screening value of high-risk human papilloma virus （HPV） E6/E7， thinprep cytologic test （TCT） and colposcopic biopsy for cervical cancer. Methods A total of 753 patients with cervical abnormalities who underwent HPVE6/E7 mRNA， TCT and colposcopic biopsy in Yiwu Central Hospital from July 2020 to July 2021 were selected. With the histopathological results as the gold standard， the screening value of different examination methods for cervical cancer was analyzed. Results Histopathological biopsies showed that there were 532 cases of low-grade squamous intraepithelial lesion （LSIL）， 203 cases of high-grade squamous intraepithelial lesion （HSIL） and 18 cases of squamous cell carcinoma （SCC） in 753 cases. HPV E6/E7 was detected in 407 cases， TCT in 288 cases and colposcopy in 206 cases; the diagnostic concordance of HPV E6/E7 and TCT was 62.42%， and the sensitivity， specificity and accuracy of HPV E6/E7， TCT and colposcopy in detecting HSIL+SCC were all lower compared with the combined test， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion The combination of HPV E6/E7， TCT and colposcopy can improve the value of screening for cervical cancer and may help in better clinical diagnosis and treatment.

[Key words] High-risk human papilloma virus; Thinprep cytologic test; Colposcopic biopsy; Cervical cancer

宫颈癌是常见的妇科肿瘤之一，全球每年有超过50万新发病例死于宫颈癌，中国占其中1/3以上，而早期筛查和有效诊断是预防和控制宫颈癌发病率和病死率的关键[1]。宫颈液基细胞学（thinprep cytologic test，TCT）是临床常用的宫颈癌筛查方法，但其受操作者主观因素影响较大，可靠性受到质疑[2]，易出现漏诊。阴道镜能帮助医师直接观察宫颈病变，还能为活检确定部位，进一步提高检出率，但其具有一定的创伤性[3]。多项研究显示，高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持续感染是公认引发宫颈癌发生及发展的重要原因，而HPV DNA分型检测存在敏感度高、特异性低的情况。2014年美国国家综合癌症网络指南指出，低于30岁妇女不以HPV DNA分型检测作为宫颈癌常规方法[4]。相关研究显示，高危型HPV可通过上调E6/E7肿瘤蛋白表达量来促进病变进展，因此HPV E6/E7检测在宫颈癌筛查过程中可能更有效，具有一定的研究价值[5]。本研究探讨了HPV E6/E7、TCT、阴道镜检查对宫颈癌的筛查价值，以期找到更合理、有效的宫颈癌筛查方法为临床提供数据支持。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选取2020年7月至2021年7月义乌市中心医院收治的均进行过HPV E6/E7 mRNA、TCT及阴道镜检查的宫颈异常患者753例，年龄35～59岁，平均（46.7±6.5）岁，孕次1～5次，平均（2.2±0.3）次，产次1～4次，平均（1.4±0.5）次。纳入标准：①3年以上性生活史；
②均进行过阴道镜检查、HPV E6/E7 mRNA及TCT检查；
③近期未进行阴道冲洗或阴道内用药、检查前24h内无性行为。排除标准：①存在宫颈手术史、盆腔放化疗史、全子宫切除病史等；
②存在宫颈上皮内瘤变史或其他系统肿瘤者；
③处于妊娠期。本研究经义乌市中心医院伦理委员会批准（伦理审批号：L2020-06-003）。

1.2  方法

1.2.1  TCT检查  患者行TCT檢查前1周内未进行过阴道用药，避开经期，采用扩阴器扩阴暴露宫颈，采用TCT专用刷收集受试者宫颈管内脱落细胞标本，将刷头浸入标本液中，随后折断刷柄，密封送检。根据子宫颈细胞学Bethesda报告系统[6]，将检查结果分为正常、良性改变、不典型鳞状细胞（atypical squamous cell，ASC）、低级别鳞状上皮内病变 （low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）、高级别鳞状上皮内病变（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）、鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC），以ASC及以上病变作为TCT阳性。

1.2.2  HPV E6/E7检测  采用TCT检查采集的标本液，以3000转/min离心5min，取沉淀加入细胞裂解液、蛋白酶K，在65℃条件下恒温孵育1.5h，每0.5h取出摇匀，采用探针捕获HPV E6/E7的mRNA进行信号放大，加入底物及其催化剂，是探针杂交结合放大分子，再加入底物与其结合，产生的化学发光信号强度与目的基因mRNA数量呈正比，结果采用相关光单位表示，超过发光阈值作为阳性。

1.2.3  阴道镜检查  采用扩阴器扩阴后调节阴道镜焦距在适当范围，用棉球擦去宫颈分泌物，然后将含3%～5%醋酸棉球停留在宫颈表面1min后取出，静置2min后观察宫颈上皮变化，阴道镜下出现点状血管、醋白上皮为阳性，反之为阴性。在宫颈表面涂3%复方碘溶液，不着色区域为阳性，并对阳性病灶进行活检。

1.2.4  活检组织病理学  采用活检标本进行脱水、包蜡、切片及苏木精–伊红染色，根据病变情况可分为正常、慢性炎症、宫颈上皮内瘤变1级（cervical intraepithelial neoplasia 1，CIN1）、宫颈上皮内瘤变2级（cervical intraepithelial neoplasia 1，CIN2）、宫颈上皮内瘤变3级（cervical intraepithelial neoplasia 1，CIN3）和浸润癌。将正常和慢性炎症纳入阴性，CIN1纳入LSIL，CIN2、CIN3纳入HSIL。本次检查由两位3年以上工作经验医师双盲阅片，诊断一致为最终结果，诊断不同由另一位高年资医师判断。

1.3  统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行处理分析，计数资料采用例数（n）和百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  HPV E6/E7、TCT检测及阴道镜检查结果分析

组织病理学检测结果显示，753例病例中有LSIL 532例，HSIL+SCC 221例（其中HSIL 203例，SCC 18例）；
HPV E6/E7检出阳性407例，阴性346例；
TCT检出阳性288例，阴性465例，阴道镜检查阳性206例，阴性547例。见表1。

2.2  HPV E6/E7、TCT检查结果一致性分析

HPV E6/E7、TCT检查结果的一致性为62.42%（470/753），包括两种方法均阳性156例和均阴性214例，检测不一致主要有TCT阳性而HPV E6/E7阴性132例、TCT阴性而HPV E6/E7阳性251例，见表2。

2.3  HPV E6/E7、TCT、阴道镜对HSIL+SCC诊断价值比较

与联合检测比较，HPV E6/E7、TCT及阴道镜检测HSIL+SCC的敏感度、特异性、准确性均较低，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

3  讨论

宫颈癌是临床常见的妇科肿瘤，但近年来其发病人群年轻化趋势明显[7]。相关文献报道，我国每年有超过13万新发宫颈癌病例，占世界新发病例总数的1/4以上，严重危害妇女身体健康[8]。目前研究认为，HPV的持续感染与宫颈癌的发生密切相关，因此采用TCT及HPV检测能及早发现宫颈病变并干预，从而改善预后。

HPV E6/E7是一种可见检测到转录活性的病毒，相对于传统的HPV DNA分型检测更能有效反映宫颈癌的发生风险。与宫颈良性病变组织相比，恶性组织中HPV DNA主要以整合形式存在，其致病机制主要是高危HPV将其基因组整合在人体细胞染色体脆弱区，从而使人体细胞DNA产生缺失或突变，引发癌基因E6、E7表达明显增加，从而导致端粒酶活性增加、抑癌基因表达受到抑制、细胞逃逸监视机制失调等一系列变化，最终引发其转化为癌细胞[9-10]。本研究结果显示，HPV E6/E7检测的阳性结果在高级别病变中升高，这可能与高级别病变宫颈病变严重程度加重而病毒载量升高有关[11]。本研究结果显示，HPV E6/E7诊断HSIL+SCC的敏感度、特异性分别为88.24%和60.15%，呈现出敏感度高而特异性低的特点，与雷冬梅等[12]研究结果相似。

TCT检查也是诊断宫颈癌前病变的常用手段。本研究结果显示，TCT诊断HSIL+SCC的敏感度、特异性分别为71.04%和75.38%，提示TCT诊断HSIL+SCC的敏感度低于HPV E6/E7，但特异性高于HPV E6/E7，推测原因可能是TCT诊断的主观性较高，特別是对于早期病变患者，若获取的病变细胞数量较少，容易发生漏诊；
而哺乳期、绝经期患者的宫颈细胞多因萎缩而呈现梭形副基底层细胞形态，与高级别病变相似，容易混淆[13-14]。此外，在操作过程中因个体技术差异等无法完全保证涂片质量，如取样不足、病变细胞未转移到玻片、样本被血液覆盖等，导致出现诊断结果的误差。同时，本研究中HPV E6/E7的阳性结果检出情况高于TCT，提示HPV E6/E7可能具有更高的诊断价值。有学者对TCT诊断为慢性炎症及LSIL患者随访3年，发现其中HPV E6/E7检测阳性病例发展为恶性病变的风险更高[15]。因此在临床工作中对于HPV E6/E7检测阳性及病毒载量高的患者，应加大随访力度及有效的抗病毒治疗，达到早发现、早治疗目的。

阴道镜检查也是宫颈癌筛查的常见手段，一般在细胞学检测及HPV检测异常时转诊阴道镜检查，若阴道镜下也无法准确发现高级别宫颈病变并定位活检，容易降低宫颈癌筛查项目的质量[16-17]。本研究中阴道镜检查诊断HSIL+SCC的敏感度、特异性分别为66.97%、89.10%，表现为特异性高而敏感度偏低，其敏感度甚至低于TCT。由于TCT在取样时刷子不仅覆盖宫颈表面，还可深入宫颈管内部，特别是大龄转化区内翻者，因此其敏感度可能会超过阴道镜[18]。

本研究结果显示，HPV E6/E7 mRNA、TCT、阴道镜检查联合检测诊断HSIL+SCC的敏感度、特异性、准确性明显高于单一检查方法，提示三者联合能有效降低宫颈癌筛查漏诊率。还有学者认为，即使在阴道镜检查阴性情况下，也需要重视TCT阳性的诊断结果[19]，而TCT检查的不足可通过高危HPV检测来进行补充，目前临床指南也推荐在有条件地区可同时进行高危HPV检测与细胞学检测[20]，从而提高宫颈癌筛查率。

综上所述，HPV E6/E7检测敏感度较高，而TCT、阴道镜检查检测特异性高，3种方法联合检测可提高对宫颈癌及高级别病变的筛查价值，从而为临床治疗提供参考。

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（收稿日期：2022–10–13）

（修回日期：2022–11–17）

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