长链非编码RNA,HCP5在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

王鹏利 魏 辉 刘超英 周小燕 罗 璐

肝细胞癌（HCC）是临床上常见肿瘤之一，流行病学调查表明，HCC在发展中国家的发病率不断升高[1-3]。HCC起病隐匿，多数患者确诊时已处于晚期，且肿瘤易转移和复发，目前对于晚期HCC患者缺乏有效的治疗方法。尽管近年来有关HCC的临床和实验研究取得了进展，但患者的远期预后仍较差。既往研究已揭示了许多与HCC发生、发展相关的调控基因和信号通路[4]，但其复杂的发病机制尚未完全明确，亟需探寻新的有效的HCC生物标志物用于疾病的早期诊断、治疗和预后预测。

长度超过200个核苷酸的长链非编码RNA（lncRNA）是一类能够在转录或转录后水平调节基因表达的非编码RNA。近年来的研究表明，lncRNA在人类肿瘤生物学中发挥着重要作用[5-6]。HCP5是近年来被发现的一种可参与肿瘤调控的lncRNA，其是HLA与P5的复合物，主要表达于免疫细胞。Gao等[7]的研究发现，HCP5可通过miR-186-5p/WNT5A信号通路诱导胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）。Lange等[8]的研究显示，HCP5与丙型肝炎病毒相关HCC有关。Zhou等[9]的研究发现，HCP5通过miR-29b-3p/DNMT3A/Akt信号通路在HCC发生和发展中起着重要作用。目前HCP5在HCC发病机制中的作用尚未完全明确。本研究探讨了HCP5在HCC组织中的表达情况及其临床意义，以期为HCC的诊治及预后预测提供新的有效指标。

1.1 患者的一般资料

选择2017年3月至2019年3月在陕西中医药大学附属医院肿瘤科接受肝切除术治疗的104例HCC患者作为研究对象，其中男性67例，女性37例，年龄42～69岁，平均年龄为（53.41±12.67）岁。根据Edmondson分级标准，其中Ⅰ～Ⅱ级49例，Ⅲ～Ⅳ级55例；
根据TNM分期标准，其中I～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期54例。纳入标准：（1）经病理检查首次确诊为HCC；
（2）术前未曾接受放射治疗或化学治疗；
（3）无其他系统恶性肿瘤。排除标准：（1）转移性肝癌；
（2）合并心、肾等重要器官功能不全；
（3）有自身免疫病。收集患者手术切除的HCC组织及其对应癌旁组织（距肿瘤边缘＞3 cm）。所有组织于采集后30 min内置于-80 ℃冰箱中保存备用。

1.2 实时荧光定量PCR法检测HCP5 mRNA的表达水平

使用TRIzol®试剂（美国Invitrogen公司）提取HCC组织和癌旁组织的总RNA，采用NanoDrop 2000微量紫外分光光度计（美国Thermo scientific公司）测定RNA的纯度。用反转录试剂盒（日本TaKaRa公司）将RNA反转录成cDNA，然后进行PCR扩增，反应体系为：cDNA产物2 μL，2×SYBR®Premix Ex Taq TM Ⅱ 8 μL， 上 游 和 下游 引 物 各 1 μL，50×ROX Reference Dye 0.4 μL，RNase-Free H2O 7.6 μL。反应条件为 ：94 ℃ 5 min；
94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共 40 个循环。以GAPDH 作为内参，采用 2-ΔΔCt法计算HCP5 mRNA的相对表达量。引物序列见表1。

表1 引物序列

1.3 信息收集和随访

收集所有患者的性别、年龄、Edmondson分级、TNM分期、肿瘤直径、乙型肝炎病史、血清甲胎蛋白（AFP）水平等信息。所有患者于出院后1个月开始随访，每3个月随访1次，采用门诊复查及电话等方式了解患者的生存情况。随访截止时间为2022年3月，随访终点为患者死亡。

1.4 统计学方法

应用SPSS26.0软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用独立样本t检验；
计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验。采用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线，采用Cox比例风险模型分析HCC患者预后的危险因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 HCC组织与癌旁组织中HCP5 mRNA的表达水平比较

实时荧光定量PCR检测结果显示，HCC组织中HCP5 mRNA的相对表达量为3.37±0.36，显著高于癌旁组织（1.04±0.08），差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 HCC组织中HCP5 mRNA的表达水平与临床病理特征的关系

以HCP5 mRNA相对表达量的中位值（2.98）作为最佳截断值，将HCC组织中HCP5 mRNA相对表达量＞2.98的患者归入高表达组（58例），≤2.98的患者归入低表达组（46例）。分析结果显示，HCP5 mRNA的表达水平与患者的Edmondson分级、TNM分期、乙型肝炎病史及淋巴结转移相关（P＜0.05），而与患者的年龄、性别、肿瘤直径及血清AFP水平无关（P＞0.05）。在HCP5 mRNA高表达组中，Edmondson高分级、TNM高分期、有乙型肝炎病史和有淋巴结转移的患者占比均显著高于低表达组（P均＜0.05）。见表2。

2.3 HCC组织中HCP5 mRNA表达水平与患者预后的关系

采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并进行logrank检验。结果显示HCP5 mRNA高表达组的3年生存率为34.48%（20例），低表达组的3年生存率为71.74%（33例），差异有统计学意义（P＜0.05）。见图1。

图1 HCP5 mRNA高表达组和低表达组的生存曲线

2.4 患者预后的影响因素

将表2中差异有显著性的参数（P＜0.05）纳入多因素Cox回归分析，结果显示，Edmondson高分级、TNM高分期、有淋巴结转移及HCP5 mRNA高表达均为HCC患者预后的独立危险因素（P均＜0.05）。见表3。

表2 HCC组织中HCP5 mRNA的表达水平与临床病理特征的关系/例（%）

表3 影响患者预后的多因素Cox回归分析

在全球范围内，HCC居恶性肿瘤相关死亡原因的第2位[10]。目前HCC的主要治疗方式是肝切除术，术后复发是影响患者预后的主要因素[11-12]。AFP是目前临床上常用的HCC诊断标志物，但仅有约50%的HCC患者的血清AFP升高[13]。因此，亟需寻找新的有效生物标志物，用于HCC的诊断和预后预测。

lncRNA不仅可与蛋白、DNA和RNA相互作用，而且是多种细胞功能的重要调节因子，参与多种生物学过程的调控。其可通过调节DNA甲基化、组蛋白修饰和染色体重构，从而调节基因的表达。许多研究表明，lncRNA在恶性肿瘤的发展中发挥着作用，这提示其是潜在的恶性肿瘤诊断和预后预测的生物标志物[14-15]。目前已有一部分与HCC进展和预后相关的lncRNA生物标志物被确认，这些lncRNA通过调节肿瘤细胞的增殖、迁移、凋亡和EMT来影响HCC的进展[16]。然而，目前已知的用于预测HCC患者预后的lncRNA生物标志物相对较少。

lncRNA HCP5是甲状腺疾病的一个新的基因位点，研究发现其在肺腺癌、结直肠癌、胰腺癌和前列腺癌中发挥着促进肿瘤细胞增殖、迁移和化学治疗抵抗的作用[17-20]，但其在HCC中的作用尚未见报道。本研究结果显示，HCC组织中HCP5 mRNA的表达水平显著低于癌旁组织，这说明HCP5可能与HCC的发生和发展相关。进一步分析HCC组织中HCP5 mRNA的表达水平与患者临床病理特征的关系，发现HCP5 mRNA的表达水平与HCC患者的Edmondson分级、TNM分期、乙型肝炎病史及淋巴结转移相关，但具体调控机制还需进一步开展基础研究揭示。

为进一步阐明HCP5的表达与HCC患者预后的关系，本研究采用Kaplan-Meier法分析了HCP5 mRNA高表达组与低表达组的术后3年生存率，结果发现前者显著低于后者，该结果提示HCP5的表达水平与患者的生存率相关。本研究采用Cox回归分析法发现，Edmondson高分级、TNM高分期和有淋巴结转移是HCC患者预后的独立危险因素，这与既往研究的结论相符[21-22]。Cox回归分析结果还显示，HCP5 mRNA高表达也是HCC患者预后的独立危险因素，该结果提示临床医生应加强对HCP5 mRNA高表达的HCC患者的术后随访，以预防复发。

综上所述，lncRNA HCP5在HCC组织中呈高表达，其与患者预后相关。本研究为单中心研究且样本量较小，结论可能存在一定的局限性，今后需开展多中心、大样本量的研究以验证本研究结论。

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