热淋清颗粒对干酵母致热大鼠的解热作用研究

卢礼平，范志梁，柴艺汇，潘 梅，何鑫菊，蒲 翔，李来来，牛建均，刘春艳，唐靖雯*，张丽艳*

1.贵州威门药业股份有限公司技术专利部(贵州 贵阳 550000)2.贵州中医药大学基础医学院(贵州 贵阳 550000)3.德江县民族中医院土家族民族医药研究所(贵州 德江 565200)

发热是外源性热源进入机体后，作用于淋巴细胞、巨噬细胞等免疫相关细胞，使其产生内生热源，该物质可作用于中枢介质进而作用于体温调节中枢，从而引起体温升高，造成机体发热[1]。

热淋清颗粒是以贵州民族特色药头花蓼(PolygonumcapitatumBuch.-Ham.ex D.Don)为原料的单方制剂，具有清热泻火，利尿通淋的功效；
可用于治疗下焦湿热所致的热淋，症见尿频、尿急、尿痛；
尿路感染、肾盂肾炎见上述证候者，临床上常用于治疗湿热蕴结下焦，机体气化不利所致诸症[2-5]。现代药理研究发现热淋清颗粒可对胃炎、肾炎、前列腺炎等多种炎症均有一定的治疗作用，而炎症反应多会引起机体不同程度的发热。中医认为发热是外邪入侵机体后，邪气与正气相争的结果，最早记载于《黄帝内经》，谓之“身热”，多属温病范畴[6-7]。目前常用的发热模型造模药物主要为2，4-二硝基酚、干酵母等[8]。2，4-二硝基酚所致发热模型致热时间较短(3～5 h)，而颈背部皮下注射干酵母混悬液造模稳定，持续时间长(20h)，是检验中药及其制剂解热作用最常使用的模型。因此本实验采用颈背部皮下注射干酵母混悬液的方法诱导大鼠发热模型[9-10]，以热淋清颗粒为研究对象，研究其对干酵母致热大鼠模型的解热效果，并探明其解热作用机制。

1.1实验材料

1.1.1 实验动物 健康SPF级SD大鼠，雌雄各半，体质量(200±20)g，购于长沙市天勤生物技术有限公司，许可证号：SCXK(湘)2019-0014。

1.1.2 药物 热淋清颗粒(贵州威门药业股份有限公司，批号：210602)、对乙酰氨基酚(特一药业集团股份有限公司，批号：32210507)、干酵母粉(安琪酵母股份有限公司，批号：D33F1)。

1.1.3 主要试剂与仪器 肿瘤坏死因子(TNF-α)ELISA试剂盒(Bioswamp，批号：RA20035/20211210)；
AVP ELISA试剂盒(Bioswamp，批号：RA20797/20211210)；
PGE2 ELISA试剂盒(Bioswamp，批号：RA20013/20211210)；
cAMP ELISA试剂盒(Bioswamp，批号：RA20134/20211210)；
甘油(Solarbio，批号：306D039);自动酶标仪(BIOBASE，型号：EL10A)；
电子温度计(界面医疗器械有限公司，型号：PL-500)；
离心机(THERMO，型号：ST 16R)、立式超低冰箱(海尔，型号：DW-86L386)。

1.2实验方法

1.2.1 热淋清颗粒混悬液的制备 将适量热淋清颗粒置于研钵中研磨，精准称取研磨后粉末24.0 g，于50 mL容量瓶定容备用(0.48 g/mL)；
精准称取研磨后粉末12.0 g，于50 mL容量瓶定容备用(0.24 g/mL)；
精准称取研磨后粉末6.0 g，于50 mL容量瓶定容备用(0.12 g/mL)。

1.2.2 分组、造模、给药 SD大鼠60只，适应性喂养7 d(实验室环境：25±2 ℃，相对湿度50%±5%)。实验当日每30 min测量1次体温，共3次，取平均值作为基础体温。随机将60只大鼠平均分为6组，即正常组、模型组、阳性组和热淋清颗粒高、中、低剂量组。除正常组皮下注射生理盐水(5 mL/kg),其余各组均皮下注射15%干酵母(5 mL/kg)制作发热模型。造模4 h后(此时每只鼠体温均升高至少0.8 ℃)，对热淋清颗粒高、中、低剂量组分别灌胃4.8、2.4、1.2 g/kg热淋清颗粒，模型组和正常组均灌胃等体积生理盐水。

1.3指标检测给药后4 h记录体温；
将各组大鼠麻醉，腹主动脉取血，于3 000 r/min、4 ℃条件下离心20 min，吸取适量上清液置于EP管中，置于4 ℃冰箱保存待测；
实验大鼠取血后，颈部脱臼处死，冰浴条件下迅速取出大鼠下丘脑，存放于-80 ℃冰箱内保存待测。严格按照ELISA试剂盒说明书对大鼠血清进行TNF-α、精氨酸加压素(AVP)指标检测，对大鼠下丘脑进行前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)指标检测。

2.1热淋清颗粒对干酵母致热模型大鼠血清AVP、TNF-α水平的影响与正常组比较，模型组大鼠AVP、TNF-α水平显著升高(P<0.01)；
与模型组比较，热淋清颗粒高、中剂量组大鼠AVP水平显著升高(P<0.01)、TNF-α水平显著下降(P<0.01)；
阳性对照组亦可降低大鼠血清TNF-α水平，见表1。

表1 热淋清颗粒对干酵母致热模型大鼠血清AVP、TNF-α水平的影响

2.2热淋清颗粒对干酵母致热模型大鼠下丘脑cAMP、PGE2含量的影响与正常组比较，模型组大鼠下丘脑cAMP、PGE2含量显著升高(P<0.01)；
与模型组比较，热淋清颗粒高、中、低剂量组和阳性对照组cAMP、PGE2含量显著下降(P<0.01)，见表2。

表2 热淋清颗粒对干酵母致热模型大鼠下丘脑cAMP、PGE2含量的影响

2.3热淋清颗粒对干酵母致热模型大鼠体温变化情况的影响各组大鼠基础体温无显著差异(P>0.05)；
干酵母致热模型建立后，与正常组比较，模型组大鼠体温显著升高(P<0.01)；
与模型组比较，热淋清颗粒高、中、低剂量组及阳性对照组干酵母致热模型大鼠体温无显著差异(P>0.05)；
使用热淋清颗粒及阳性对照药物干预后，与正常组比较，模型组大鼠体温显著升高(P<0.01)，热淋清颗粒高、中剂量组和阳性对照组均可显著降低模型大鼠体温(P<0.01)，热淋清颗粒低剂量组亦可显著降低模型大鼠体温(P<0.05)，见表3。

表3 热淋清颗粒对干酵母致热模型大鼠体温变化情况的影响

头花蓼是热淋清颗粒的主要原料，为蓼科植物头花蓼的全草，文献记载其味苦辛，性温平，清热解毒治热淋[11]。目前对热淋清颗粒的研究主要集中于其对泌尿系统感染等，大量的动物实验及临床研究已证明热淋清颗粒疗效显著并成为临床治疗泌尿系统感染的首选药之一。现代研究发现其对胃炎、肾炎等多种炎症也有一定的治疗作用，而炎症多会引起机体发热的症状。中医认为，发热是外邪入侵后、邪气与正气相争的结果，多用清上焦蕴热药物缓解机体发热。治疗下焦热淋症的中药多具有“清上达下”的作用[12]，因此推测热淋清颗粒具有清上焦蕴热的作用。2020年热淋清颗粒已被贵州省中医药管理局纳入《贵州省新冠肺炎中医康复方案》中，因此本课题组拟观察热淋清颗粒的解热作用探讨其作用机理，为临床提供更多选择。

发热是机体在外源性物质刺激下产生内生热源，如：TNF-α导致中枢体温调节介质失衡。cAMP和PGE2均为体温正调节介质，AVP为体温负调节介质，当体温负调节介质降低与/或体温正调节介质升高时，机体即出现发热症状[13]。

TNF-α等促炎因子通过多种不同途径富集于体温调节中枢，提高机体体温调控点，造成机体体温异常升高，使机体发生炎性反应，是重要的内生热源[14]。TNF-α可作用于体温调节中枢，导致中枢体温调节介质失衡，其可促进下丘脑产生PGE2。有研究发现[15]将TNF-α注射至大鼠静脉可诱导发热，并显著增加大鼠下丘脑中PGE2水平[15]。PGE2是花生四烯酸代谢产物，现已被公认为与发热关系最密切且相关研究最为丰富的体温中枢正调节因子，其可刺激下丘脑内温度相关神经元，改变突触间放电频率，且可与G蛋白偶联，升高下丘脑中cAMP水平。cAMP被认为是最接近于体温调节中枢末端的正调节因子。微量cAMP注射入动物脑内便可造成发热[16]。当机体发热时，PGE2和cAMP在下丘脑中含量将显著升高。AVP是由下丘脑合成、分泌的激素类物质，其可改变由体温正调控因子造成的温度神经元突触放电异常，现代研究证实[17]其可明显抑制由内生热源引起的机体发热，是体温调节中不可或缺的负调节因子。

本组结果表明，热淋清颗粒高、中剂量组大鼠体温显著低于模型组(P<0.01)，且具有解热时间久，作用温和的特点。与其对应的内生热源物质血清TNF-α水平均较模型组显著下降(P<0.01)，PGE2、cAMP均为下丘脑体温正调节介质，模型组大鼠下丘脑PGE2、cAMP水平显著高于正常组(P<0.01)，热淋清颗粒高、中、低剂量组均可显著降低模型大鼠下丘脑PGE2、cAMP水平(P<0.01)。AVP为体温负调节介质，模型组大鼠血清AVP水平显著高于正常组(P<0.01)，而热淋清颗粒高、中剂量组大鼠血清AVP水平显著高于模型组(P<0.01)，表明热淋清颗粒可通过调高体内体温负调控因子水平，从而发挥解热作用。

综上所述，推测热淋清颗粒作用机制可能是抑制机体内生热源物质和体温正调节因子产生、增加体温负调控因子水平，从而发挥解热作用。本实验结果为进一步探明热淋清颗粒解热机制奠定了理论基础，但对于其药效物质还需后续进行进一步研究。

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