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关节克痹丸质量标准研究

来源:专题范文 时间:2024-02-03 10:57:02

孙乐明 赵君 陈芝慧 王文渊

摘要:目的建立关节克痹丸定性定量检测方法,为其质量标准提高提供依据。方法采用薄层色谱法,对制剂中麻黄和虎杖进行定性鉴别。通过高效液相色谱法测定了有效成分大黄素的含量。结果 TLC鉴别方法专属性好,斑点清晰且分离度好;HPLC含量测定结果显示,大黄素在12.217μg~28.507μg/mL,线性关系良好。仪器精密度、重复性、稳定性、加样回收率的RSD值均符合要求。结论所建立的方法操作简单,重复性较好,可用于关节克痹丸的质量控制研究。

关键词:关节克痹丸;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法

【中图分类号】 R322.7+2 【文献标识码】 A      【文章編号】2107-2306(2022)13--02

关节克痹丸的标准收载于卫生部部颁标准中成药成方制剂第二十册,为浓缩丸剂,主要成份由川乌(制)、虎杖、麻黄等15味中药组成。具有祛风散寒、活络止痛的功效,用于关节炎、四肢酸痛、伸展不利[1]。方中川乌(制)、草乌(制)等为主药,起祛风止痛之效,配以防已、独活等除湿止痛,配以桂枝、麻黄等温阳利水化气,再佐以黄芩等清热并防止诸药过于温燥,全方配伍适宜,具有消除关节肿痛,调节免疫平衡,恢复关节功能等作用。其临床使用有效、安全,不良反应极少且较轻[2]。原标准为卫生部98年标准,其内容只有1项粉末鉴别和1项麻黄的TLC鉴别以及丸剂常规检查项目,难以有效的控制药品质量。本次药品标准提高研究,通过对原标准符合基础上,重新对本品的性状、鉴别、检查以及含量测定进行了全面研究,并根据研究结果重新制订了关节克痹丸药品质量标准(草案)。增加了虎杖的TLC鉴别,并通过方法学研究,建立了有效成分大黄素的含量测定方法,以进一步提高该药的质量控制水平。

1. 材料与仪器

薄层板1:硅胶G薄层板(薄层板,规格:100×200mm,);薄层板2:自制硅胶G薄层板(固定相:硅胶G,粘合剂:0.5%的CMC-Na,涂布厚度:0.3mm,规格:100×200mm); MS304s/01电子天平;P-1型薄层色谱展开缸;5μL点样毛细管;SLD-1薄层色谱摄影仪;Waters2690高效液相色谱仪,waters2489双波长紫外检测器。

关节克痹丸(20151201,20151202,20151203,贵州信邦制药股份有限公司);盐酸麻黄碱对照品,中国药品生物制品检定所,批号为0714-9903;大黄素对照品,中国食品药品检定研究院,批号为110756-200110。甲醇、乙腈均为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为超纯水。

2.方法与结果

2.1虎杖的TCL鉴别[3]

取3批本品各10粒,研碎,加甲醇10mL,超声处理15min,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷1mL使其溶解,作为供试品溶液。取大黄素对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取对照品溶液5μL,供试品溶液各10μL。分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置于紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,置于氨蒸气中熏后,斑点变为红色。

2.2方法学验证

2.2.1专属性考察

吸取对照品溶液5μL,供试品溶液各10μL。点样于同一硅胶G薄层板上,展开,取出,晾干,置于紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,置于氨蒸气中熏后,斑点变为红色。表明该方法的专属性良好。

2.2.2耐用性考察

(1)更换不同品牌薄层板

吸取对照品溶液5μL,供试品溶液各10μL。点样,更换不同品牌的薄层板(薄层板1、薄层板2),展开,取出,晾干,置于紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,置氨蒸气中熏后,斑点变为红色,且更换不同品牌薄层板后,各薄层板之间无显著差异,表明更换不同品牌薄层板对虎杖的薄层鉴别无影响。

(2)更换不同温度

吸取对照品溶液5μL,供试品溶液各10μL。点样于同一硅胶G薄层板上,展开,取出,晾干,置于紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,置氨蒸气中熏后,斑点变为红色,且更换不同温度后,各薄层板之间无显著差异,表明更换不同温度对虎杖的薄层鉴别无影响。

(3)更换不同湿度

吸取对照品溶液5μL,供试品溶液各10μL。点样于同一硅胶G薄层板上,展开,取出,晾干,置于紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,置氨蒸气中熏后,斑点变为红色,且更换不同湿度后,各薄层板之间无显著差异,表明更换不同湿度对虎杖的薄层鉴别无影响。

2.3大黄素的含量测定[4-5]

2.3.1色谱条件

Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温35℃,甲醇-0.1%磷酸水(80:20)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长254nm。

2.3.2系统适用性试验

吸取对照品溶液20μL注入高效液相色谱仪测定,理论板数按大黄素计算大于4000。

2.3.3溶剂制备

对照品溶液的制备:精密称取大黄素对照品适量,加甲醇制成每1mL含20μg的溶液,即得。

供试品溶液的制备:取本品适量,研细,取粉末1g,精密称定,置烧瓶中,加三氯甲烷30ml和2.5mol/L硫酸20mL,置80℃水浴中加热回流2h,冷却至室温,摇匀。分取三氯甲烷液,水层用三氯甲烷20mL振摇提取,合并三氯甲烷液,回收溶液至干,残渣加甲醇适量使溶解,并转移至25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

阴性制剂溶液的制备:取去除虎杖的阴性制剂,同供试品溶液的方法制备,即得。

2.3.4方法学考察

(1)空白试验

取阴性制剂溶液20μL注入高效液相色谱仪测定,结果表明,在大黄素峰处基本无干扰。

(2)标准曲线及线性范围

取大黄素适量,精密称定,制成81.45μg/mL的标准贮备液,再精密吸取上述对照品溶液1.5mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL,用甲醇定容至10mL,分别吸取20μL对照品溶液注入液相色谱仪测定。结果见表-1。

经回归分析,得回归方程:A=74085C+57076,相关系数r=0.9991,线性范围12.217~28.507μg/mL。

(3)精密度试验

吸取浓度为20.362μg/mL的对照品溶液20μL注入高效液相色谱仪测定,连续6次,结果见表-2。

(4)重复性试验

配置供试品溶液(批号)共6份,分别吸取20μL溶液注入液相色谱仪测定,结果见表-3。

(5)加样回收率试验

取批号关节克痹丸,研碎的粉末约0.5g,精密称定,共6份,精密加入81.45μg/mL大黄素对照品溶液3.1mL,混匀后,其他处理同含量测定。分别吸取20μL溶液注入液相色谱仪测定,结果见表-4。

(6)供试品稳定性试验

取供试品溶液,于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h精密吸取20μL注入高效液相色谱仪,测定样品12h的稳定性。结果表明,供试品在12h内稳定,见表-5。

(7)样品含量测定

分别精密吸取20μL注入高效液相色谱仪测定,结果如表-6所示。

3. 结论

质量标准是中药研究的重要内容之一,需要在中药的处方组成、制备工艺和药效物质等基础上,运用现代科学技术,建立科学、合理、可行的质量标准,从而保障药品的质量可控[6]。因此,本实验对关节克痹丸中虎杖进行薄层鉴别,对有效成分大黄素的含量进行测定,制定关节克痹丸的质量标准,提高其质量控制水平,保证药品的安全性和有效性。结果表明该方法操作简单,结果准确,专属性强,稳定性和重复性均较好,为关节克痹丸质量标准的提高提供依据。

参考文献:

[1]中华人民共和国药典委员会.卫生部药品标准.中药成方制剂,第20册 [S].1998:87.

[2]殷生楠,殷勇,柳冬梅,等. 关节克痹丸的有效性和安全性临床研究[J]. 现代医药卫生,2007,23(21):3176-3177. 67-2272.

[3]貴州信邦制药股份有限公司. 关节克痹丸中虎杖的鉴别方法:CN201610752418.7[P]. 2017-02-01. 75.

[4]施惠埙. 高效液相色谱法测定关节克痹丸中大黄素含量[J]. 实用中医药杂志,2010,26(11):807.

[5]周红,俞春芳,王金锋. HPLC法测定关节克痹丸中大黄素含量[J]. 中国药师,2007,10(5):474-4.

[6]郭静,玄振玉,谢燕.中药复方新药药学研究中的问题与思考[J].中草药,2020,51(08):22.

作者简介:孙乐明(1984-),男,硕士,助理研究员,研究方向为中药材栽培与开发。

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