QuEChERS-气相色谱法测定茶叶中格螨酯残留量

◎王同珍，柯丽群，张泳仪

（广东省中鼎检测技术有限公司，广东 东莞 523000）

我国是茶叶生产和消费大国，规模化茶树的种植离不开农药的使用，因此难以避免农药残留问题[1-4]。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763-2021）中规定了茶叶中106 项农药残留限量标准[5]，包括格螨酯的最大残留量，然而目前尚未有格螨酯检测的相关国家标准。基于此，本文建立一种基于QuEChERS 前处理技术结合气相色谱测定茶叶中格螨酯残留的检测方法，以供相关人员参考。

1.1 材料与试剂

普通茶叶，市场采购。

标准物质格螨酯（纯度≥99.5%，德国DR.Ehrenstorfer 公司）；
正己烷、丙酮、乙腈（色谱纯，美国Merck 公司）；
无水硫酸镁（优级纯，天津科密欧）；
醋酸钠（优级纯，天津大茂）；
乙二胺-N-丙基硅烷（PSA，40～63 μm，上海安谱）；
0.22 μm有机滤膜（天津津滕公司）实验室用水为Milli-Q超纯水；
乙腈（色谱纯，美国Sigma 公司）。

1.2 仪器与设备

Agilent 7890B 气相色谱仪（美国安捷伦公司）；
BSA224S 电子天平（精度为0.000 1 g，美国赛多利斯公司）；
METTLERMS105 电子天平（精度为0.000 01 g，美国梅特勒公司）；
VX-Ⅲ多管涡旋振荡器（安简科技公司）；
M64 高通量平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；
GTR16-2 高速冷冻离心机（北京时代北利公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

将茶叶样品放入样品粉碎机中粉碎，样品全部过20 目的标准网筛，得到均匀的茶叶样品。称取2.5 g试样于50 mL 塑料离心管，加10 mL 水静置30 min，加入10 mL 乙腈、6 g 硫酸镁、1.5 g 醋酸钠，剧烈振荡1 min 后，6 500 r·min-1离心3 min，吸取6 mL 上清液到含900 mg 硫酸镁及150 mgPSA 的15 mL 离心管中，涡旋混匀1 min。6 500 r·min-1离心3 min，准确吸取2 mL 上清液于15 mL 离心管中，氮吹浓缩至近干，1 mL 丙酮复溶，过0.22 μm 有机滤膜，供GCECD 仪器分析。

1.3.2 标准溶液的配制

标准储备液（1 mg·mL-1）：称取10 mg 格螨酯标准物质（精确至0.000 01 g）于10 mL 容量瓶，用正己烷定容至刻度，混匀，避光-18 ℃保存。

标准中间液（5 μg·mL-1）：准确移取格螨酯储备液（1 mg·mL-1）125 μL 到25 mL 容量瓶，正己烷定容至刻度，混匀，避光-18 ℃保存。

基质工作液：称取不含格螨酯的茶叶阴性样品2.5 g试样于50 mL 塑料离心管，加10 mL 水静置30 min，加入10 mL 乙腈、6 g 硫酸镁、1.5 g 醋酸钠，剧烈振荡1 min 后，6 500 r·min-1离心3 min，吸取6 mL 上清液到含900 mg 硫酸镁及150 mg PSA 的15 mL 离心管中，涡旋混匀1 min。6 500 r·min-1离心3 min，准确吸取2 mL 上清液于15 mL 离心管中，氮吹浓缩至近干，加入1 mL 相应浓度的标准工作液复溶，过微孔滤膜，配制成0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.020 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1、0.500 μg·mL-1标准系列溶液，现配现用。

1.3.3 仪器条件

检测器：Agilent 7890B（ECD）；
色谱柱：Agilent 19091J-413 HP-5（30 m×320 μm，0.25 μm）；
进样口温度：280 ℃；
进样量：1 μL；
柱箱升温程序：130 ℃（0.5 min）→40 ℃（1.0 min）→220 ℃（1.0 min）→25 ℃（1.0 min）→300 ℃（1.0 min）；
载气流量：2 mL·min-1；
检测器温度：340 ℃。

1.3.4 计算公式

试样中格螨酯含量的计算公式为

式中：x 为试样中格螨酯的含量，mg·kg-1；
c 为从基质曲线中得到的被测样液中格螨酯的溶液浓度，μg·mL-1；
v 为试样溶液的定容体积，mL；
m 为试样的称取质量，g；
f 为试样的稀释倍数。

2.1 试样前处理的选择

茶叶样品含水量较少，本研究称取2 份2.5 g 不含格螨酯的阴性样品，均添加0.10 mg·kg-1格螨酯标液，一份样品按照1.3.1 节进行前处理，另一份样品除不加入10 mL 水，其余步骤按照1.3.1 节进行前处理，平行测定6 次，以格螨酯的回收率和相对标准偏差（RSD%）评价2 种不同的前处理，结果如表1 所示。结果表明，称取样品后，加入10 mL 水，能够提高样品的提取效率和试验的稳定性。

表1 样品处理结果表

2.2 基质效应考察

基质效应指茶叶样品中除格螨酯以外的其他成分对格螨酯测定值的影响，通常包括抑制或者增加格螨酯响应2 个方面。合理评价基质效应的影响，并选择适当的方法减少或者消除茶叶基质对格螨酯的影响，可以提高格螨酯测定的准确性。按照1.3.1 节进行前处理，得到茶叶基质溶液，分别用茶叶基质溶液和正己烷试剂，配制基质曲线与溶剂曲线（正己烷），对比相同质量浓度格螨酯的峰面积，进而评估茶叶的基质效应，结果如表2 所示，表明茶叶基质对格螨酯有较强的抑制作用，格螨酯的茶叶基质峰面积与提取溶剂峰面积的比值均小于0.70。因此，本研究选择空白茶叶基质曲线进行定量，从而达到减小茶叶基质影响的目的。

表2 基质效应考察表

2.3 线性范围

以格螨酯的质量浓度（X，μg·mL-1）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制基质曲线，结果见表3。由表3 可知，格螨酯在0.005～0.500 μg·mL-1质量浓度范围内线性关系良好，相关系数R2大于0.995，可通过基质曲线方程对样品中的格螨酯进行准确定量。

表3 格螨酯基质曲线方程表

2.4 定量限、加标回收和精密度

称取一系列阴性样品2.5 g 试样于50 mL 塑料离心管，添加浓度为0.010 mg·kg-1、0.050 mg·kg-1、0.500 mg·kg-1的格螨酯标液，加10 mL 水静置30 min，按照1.3.1 中的步骤进行处理，所得样液供GC-ECD 仪器分析，结果如表4 所示。在0.010 mg·kg-1添加水平下，格螨酯回收率为62.1%～73.2%，相对标准偏差（RSD）为5.39%（n=6）；
在0.050 mg·kg-1添加水平下，格螨酯回收率为69.8%～80.7%，相对标准偏差（RSD）为6.11%（n=6）；
在0.5 mg·kg-1添加水平下，格螨酯回收率为78.9%～95.1%，相对标准偏差（RSD）为7.93%（n=6）。结果表明，在0.010 mg·kg-1的添加水平下，能准确地定量，回收率良好，信噪比大于10，故本方法定量限为0.010 mg·kg-1。

表4 格螨酯3 水平加标回收结果表（n=6）

建立茶叶中农药残留格螨酯的QuEChERS-气相色谱测定方法。试样经复水，乙腈提取、QuEChERS 净化，采用HP-5 色谱柱分离，电子捕获检测器（ECD）检测，外标法定量。在优化实验条件下，格螨酯在0.005～0.500 μg·mL-1线性良好，线性相关系数为0.997 3。在阴性样品添加0.010～0.500 mg·kg-1的格螨酯，平行检测6 次，回收率为62.1%～95.1%，相对标准偏差为5.39%～7.93%。该方法灵敏度高、准确性好、重复性好，适用于茶叶中格螨酯的残留检测。

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