酸枣仁泡腾片的制备及药效评价

王泽龙 徐建豪 吉训娟 谭玉莹 李传乐 张巳奇 何 颖

（吉林农业科技学院中药学院 吉林市 132109）

由于现代社会生活节奏加快，外界压力的逐渐增加，睡眠障碍已经成为困扰现代人的普遍问题[1]。中药作为治疗失眠的传统手段，其临床效果为人们所认可，而其中的酸枣仁汤更是因其显著的睡眠改善效果获得大量睡眠障碍人群的青睐[2]。

酸枣仁汤为汉代张仲景的《金匮要略·血痹虚劳病》中的经典方。各种药物的配伍使用不仅可以滋养肝脏和血液以舒缓心灵，还可以清除体内热量消除烦恼，滋养血液和安抚神经。

目前酸枣仁汤的研究主要集中于传统汤剂，国家食品药品监督管理总局批准的酸枣仁汤同方制剂主要有酸枣仁合剂和酸枣仁糖浆两种。传统汤剂制备要求较高，携带不易且饮用不方便。糖浆剂和合剂均为液体制剂，不利于分剂量和携带不方便，易破碎和污染衣物。中药泡腾片是这些年才开发出的一种中药剂型，方便随身携带和分剂量。另外溶于水变成溶液服用即能迅速起效，也可以提高生物利用度。处方中含有柠檬酸和甜味剂，口感酸甜易于接受，该剂型也越来越受到年轻患者的欢迎。

因此本研究欲在酸枣仁汤处方基础上，开发酸枣仁泡腾片，确定其最佳处方和制备工艺，并通过协同睡眠实验考察其镇静安神的药理作用。

1.1 材料

1.1.1 试药：酸枣仁（河北荷花池药业公司）；
知母（河北福君堂药业有限公司）；
川芎（河北福君堂药业有限公司）；
茯苓（河北全泰药业有限公司）；
甘草（河北福君堂药业有限公司）；
碳酸氢钠（食品级、睢县优宝嘉食品有限公司）；
无水柠檬酸（食品级、睢县优宝嘉食品有限公司）；
乳糖（食品级、睢县优宝嘉食品有限公司）；
无水乙醇（食品级、河南鑫河阳酒精有限公司）；
聚乙二醇600（食品级、佳佳生物科剂有限公司）；
阿斯巴甜（食品级、睢县优宝嘉食品有限公司）；
氨基甲酸乙酯（分析纯、国药集团化学试剂有限公司）。

1.1.2 实验动物：本研究所用小鼠均为健康的雄性小鼠（昆明种、清洁级、购买于辽宁省实验动物资源中心），体重在20g±2g左右，共50只。对小鼠进行常规喂养，保持室温在25±2℃，通风良好，及时更换垫料，保证小鼠正常生长。

1.1.3 仪器设备：密封型手提式粉碎机（ZH200A、西安宝正实业有限公司）；
分析天平（JYT-2、上海医用激光仪器厂）；
循环水式真空泵（SHB-III、上海豫康科教仪器设备有限公司）；
旋转蒸发仪（N-1100，上海爱朗仪器有限公司）；
OA型恒温鼓风干燥箱（DHG-914、常州诺基仪器有限公司）；
单冲式压片机（TDP-15、长沙市中南制药机械厂）；
片剂硬度测试仪（YD-1、天津市精拓仪器科技有限公司）；
pH计（FE20、梅特勒-托利多仪器有限公司）。

2.1 工艺研究

2.1.1 制法：酸枣仁粗粉500g、茯苓200g、川芎200g、知母200g、甘草100g，浸泡30分钟加9倍水加热回流提取3次，每次1.5h，然后过滤并合并滤液。通过旋转蒸发浓缩滤液至黏稠状，鼓风干燥粉碎过100目筛得到浸膏粉。通过酸碱分开制粒法制备：取一半浸膏粉加柠檬酸、乳糖、阿斯巴甜，混匀后加适量无水乙醇制成颗粒；
PEG6000加热熔融后加入碳酸氢钠混匀，放冷凝固后粉碎成细粉，加入剩余浸膏粉、适量乳糖、阿斯巴甜，混匀后加适量无水乙醇制成颗粒，与上述颗粒混匀，压制成1000片，每片0.5g。以每组压制20片、每片0.5g为标准进行单因素实验。

2.1.2 辅料添加量的选择：按“2.1.1制法”项下所述方法，其他条件不变分别以泡腾剂添加量，泡腾剂酸碱比，甜味剂添加量，润滑剂添加量等进行单因素实验。以泡腾片的外观、口感、色泽、风味和崩解时限为标准。感官评分标准见表1，从而筛选酸枣仁汤泡腾片的最佳辅料添加量。

表1 感观评分标准Tab.1 Sensory scoring criteria

2.2 质量评价：根据单因素实验结果选择出最佳的泡腾剂添加量、泡腾剂酸碱比、甜味剂阿斯巴甜添加量和PEG6000添加量，按照“2.1.1制法”中规定的制法制备三批酸枣仁泡腾片，按照中国药典2020年版四部制剂通则中规定的项目检测其外观性状、pH值、硬度、崩解时限及重量差异，以验证泡腾片的处方及工艺的可行性、重复性和稳定性。

2.3 药效评价：通过小鼠协同睡眠实验对酸枣仁泡腾片的安全性及睡眠改善作用进行评价。

2.3.1 实验分组及模型建立：将已经正常喂养7天的实验小鼠随机分为5组，每组10只。分别为空白对照组（摄入水，0.2mL/20g）、阳性对照组（摄入酸枣仁汤，相当于原药材6g/kg，人用量10倍）、低剂量组（摄入酸枣仁泡腾片，相当于原药材3g/kg，人用量5倍）、中剂量组（摄入酸枣仁泡腾片，相当于原药材6g/kg，人用量10倍）、高剂量组（摄入酸枣仁泡腾片，相当于原药材12g/kg，人用量20倍）。分别灌胃给药，每天1次，每次0.2mL，连续给药7天。同时保证其正常进食进水，末次给药前12h禁食禁水。

2.3.2 一般观察：试验期间每天观察各组小鼠给药后的皮毛、自主行为、精神状况、排便及给药首末体重的变化。

2.3.3 直接睡眠实验：末次给药30min后，观察各组小鼠是否出现睡眠情况。观察并记录每组60min内小鼠入睡数量和睡眠时间。以小鼠翻正反射消失做入睡判定指标，以小鼠消失翻正反射到恢复正常的时间作为小鼠的睡眠时间。以高、中、低剂量给药组小鼠的入睡只数及睡眠时间来判定酸枣仁汤泡腾片对直接睡眠的影响。并与空白对照组和阳性对照组实验数据对比，来判断酸枣仁汤泡腾片与原剂型汤剂在直接睡眠促进作用上的区别。

2.3.4 氨基甲酸乙酯协同睡眠实验：末次给药后60min，各组小鼠均腹腔注射氨基甲酸乙酯，注射剂量为1.0g/kg（0.2mL/20g）。从给药到小鼠翻正反射消失时间记录为睡眠潜伏期；
以翻正反射消失到恢复翻正反射时间作为睡眠持续时间。记录给药组小鼠和对照组小鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间，考察酸枣仁泡腾片的协同睡眠作用，并与酸枣仁汤对比，考察剂型改变对药理作用的影响。

3.1 处方研究结果分析：将所得单因素分析数据绘制成图，可得如图1、2、3、4。

图1 泡腾剂添加量对泡腾片崩解时限的影响Fig.1 Effect of effervescent dosage on disintegration time of effervescent tablets

图2 泡腾剂酸碱比对泡腾片崩解时限、感官评分的影响Fig.2 Effect of acid-base ratio of effervescent tablets on disintegration time limit and sensory score of effervescent tablets

图3 阿斯巴甜添加量对口感的影响Fig.3 Effect of aspartame addition on taste

图4 润滑剂对崩解时间和观感评分的影响Fig.4 Effects of lubricants on disintegration time limit and sensory score

由图可优选泡腾剂添加量为40%，酸碱比为1.2:1，润滑剂PEG6000添加量为5%，甜味剂添加量为0.3%。以此做为制法最佳配比。

3.2 质量评价结果分析：按此制法制备3批泡腾片进行工艺验证，按照2020版《中国药典》附录0101片剂制剂通则，检查外观光、重量差异、崩解时限、pH值、硬度，测定结果如下。

由表2数据可知，制备的三批泡腾片，各检测项均符合规定。

表2 工艺验证结果Tab.2 Process validation results

3.3 药效评价结果分析

3.3.1 一般观察结果：试验期间每天观察各组每只小鼠的外表如毛色体重等均无明显差异，行为、精神情况也都正常，给药组和对照组排便情况无明显异常。

3.3.2 对直接睡眠影响结果：不同实验组小鼠的直接睡眠的影响观察中，60min内各实验组小鼠都没有出现睡眠情况，低中高剂量组及阳性对照组的部分小鼠出现闭眼、安静现象，但翻正反射都没有消失。以此判断酸枣仁泡腾片溶液对直接睡眠无影响作用。3.3.3氨基甲酸乙酯协同睡眠实验结果分析：采用氨基甲酸乙酯协同睡眠实验考察不同实验组小鼠的睡眠潜伏时间和睡眠持续时间，详细结果见表3。

表3 泡腾片溶液对小鼠睡眠时间的影响Tab.3 Effect of effervescent tablet solution on sleep time of mice

由表3数据可知，在对缩短小鼠rem和延长睡眠持续时间的影响中，高剂量组＞中剂量组＞阳性对照组＞低剂量组＞空白对照组，与空白对照相比，阳性对照组、高剂量组、中剂量组具有显著差异，可见对缩短睡眠潜伏时间和延长睡眠持续时间酸枣仁汤和酸枣仁泡腾片均有显著效果。跟阳性对照组相比，中剂量组差异不显著，其余组均差异显著，可见相同给药量的泡腾片和汤剂缩短小鼠入睡时间和延长睡眠持续时间作用相近，无明显差异。以此判断酸枣仁泡腾片溶液对缩短睡眠潜伏时间、睡眠持续时间有显著影响作用，药效与汤剂相似。

本研究在酸枣仁汤的基础上，开发出了改良型新药酸枣仁泡腾片。通过单因素考察确定了酸枣仁泡腾片泡腾剂添加量、泡腾剂酸碱比例及甜味剂阿斯巴甜的用量，从而确定了泡腾片的处方和工艺。采用该制法制备三批成品，按2020版中国药典制剂通则中的要求检测制品，结果均符合规定。通过工艺验证证明酸枣仁泡腾片制备工艺稳定，能够持续制备出合格产品。

通过一般观察，给药后的小鼠与阴性对照组和阳性对照组对比，皮毛、排便及体重无明显改变，证明该泡腾片无明显毒性和不良反应。阳性对照组和高、中、低剂量给药组小鼠均出现不同程度的安静、活动减少等外观行为的改变。通过小鼠直接睡眠和协同睡眠实验，高、中、低剂量酸枣仁泡腾片给药均能够缩短rem、增加睡眠持续时间，中剂量组与阳性对照酸枣仁汤效果相当，表明酸枣仁汤制成泡腾片后药理作用未发生明显改变。

酸枣仁汤作为我国治疗睡眠问题的名方，制备成酸枣仁汤泡腾片后保留了酸枣仁汤原本的药效，还使其携带、饮用变得更方便。将传统中药与现代制备工艺相结合，使传统中药焕发生机，更具市场前景。

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